全自動冰凍切片機操作指南：從樣本制備到安全規范  

***、儀器用途與原理概述  

全自動冰凍切片機通過低溫冷凍（-20℃~-30℃）固定組織樣本，利用高精度切片刀將冷凍樣本切成5-10μm的薄片，適用于病理快速診斷（如術中冰凍病理）、免疫熒光染色等場景。其核心原理是通過低溫抑制細胞自溶，保持組織形態結構完整。  

二、操作前準備：環境與樣本預處理  

1.儀器環境要求  

溫度：實驗室室溫控制在18-25℃，避免空調直吹儀器導致溫度波動。  

電源：使用穩壓電源，接地良好，防止靜電干擾。  

清潔：用75%乙醇擦拭切片機臺面、樣本托、刀片架，避免樣本污染。  

2.樣本預處理  

組織固定：新鮮組織需在30分鐘內處理，去除多余脂肪和壞死組織，體積不超過1cm×1cm×0.5cm（過大易導致冷凍不均）。  

冷凍劑準備：常用OCT包埋劑（optimalcuttingtemperaturecompound），或異戊烷+液氮（適用于特殊樣本）。  

三、詳細操作步驟：分階段標準化流程  

1.開機與溫度設置（以LeicaCM1950為例）  

開機順序：  

接通電源，打開主機開關，等待系統自檢（約2分鐘）。  

在觸摸屏設置冷凍艙溫度（常規-25℃）、樣本托溫度（-30℃），預冷30分鐘至溫度穩定。  

參數校準：  

校準切片厚度（常用5μm，神經組織可設為8-10μm），檢查刀架角度（推薦5°-8°，角度過大易導致切片褶皺）。  

2.樣本包埋與冷凍  

包埋操作：  

在樣本托上滴適量OCT，放置組織（切面朝上），用預冷鑷子調整位置，避免氣泡。  

將樣本托放入冷凍臺，快速滴加OCT覆蓋組織，直至形成均勻包埋塊（約3分鐘冷凍至固態）。  

冷凍確認：  

輕敲包埋塊，若發出清脆聲響，表明冷凍充分；若發軟，需重新冷凍（可噴液氮輔助，但需避免直接接觸組織）。  

3.切片與展片  

裝載樣本與刀片：  

將冷凍好的樣本托固定在樣本臂上，調整位置使組織切面與刀片平行。  

安裝***次性冰凍切片刀（佩戴防割手套），調節刀片高度至剛接觸樣本表面。  

自動切片流程：  

按下“開始切片”按鈕，儀器自動以設定厚度切取薄片（若切片碎裂，可能因：①樣本冷凍不充分；②刀架角度不當；③切片速度過快）。  

用預冷載玻片輕貼切片，靠OCT黏性吸附切片（載玻片需提前在-10℃冰箱預冷）。  

4.切片后處理  

染色準備：  

切片若用于HE染色，需立即放入固定液（4%多聚甲醛）固定10分鐘；若用于免疫熒光，可直接放入-80℃保存或立即染色。  

質量檢查：  

在顯微鏡下觀察切片平整度、細胞形態（理想切片應無裂痕、細胞無擠壓，核漿分明）。  

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