結果的主要因素：

　　***、儀器性能與穩定性

　　1. 輸液泵精度：高壓恒流泵的流量波動直接導致保留時間漂移，精密度需控制在±0.5%以內。長期使用的單向閥磨損會引發脈動，造成基線噪聲增大。

　　2. 檢測器靈敏度：紫外檢測器需定期校驗燈源能量，氘燈使用壽命約1000小時，衰減后靈敏度下降；示差折光檢測器易受溫度擾動，需配備高精度溫控模塊。

　　3. 進樣系統重復性：手動進樣針堵塞或定量環殘留會導致進樣量偏差，自動進樣器的計量泵校準誤差應<1%。

　　二、色譜柱效能

　　1. 固定相特性：C18柱的長鏈烷基密度決定疏水性強弱，封尾處理程度影響次***相互作用；氨基酸柱適合生物大分子分離，硅膠基質耐pH范圍限制運行條件。

　　2. 柱效衰減規律：理論塔板數隨使用次數增加呈指數下降，反相柱每千次進樣約損失5%柱效。柱前篩板堵塞會導致峰展寬，背壓升高超過上限需立即沖洗。

　　3. 柱溫控制：溫度每變化1℃，保留時間改變約2%。恒溫箱控溫精度需達±0.1℃，特殊條件下需配置半導體制冷模塊。

　　三、流動相體系

　　1. 溶劑純度：甲醇/乙腈中的雜質峰會干擾低紫外吸收物質檢測，建議使用色譜純試劑并在線脫氣。緩沖鹽析出會堵塞管路，磷酸鹽體系需添加離子對試劑改善溶解性。

　　2. pH值調控：酸性條件下硅醇基抑制解離，堿性環境中需選用耐堿填料。離子抑制效應使弱酸/弱堿物質呈現異常保留行為，可通過調節緩沖液濃度優化。

　　3. 梯度程序設計：非線性梯度(如凸形曲線)可加速強保留組分洗脫，但可能導致弱保留物質分離度下降。梯度延遲時間需精確匹配混合器體積。

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