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凝膠凈化色譜儀的使用規范細節

2025-11-10 09:17:37

凝膠凈化色譜儀是***種基于分子篩效應的高效液相色譜技術,廣泛應用于高分子材料分析、食品檢測、藥品純化等領域。以下從原理、操作流程及維護要點等方面綜合闡述其使用要點:

  ***、基本原理與核心組件

  分離機制:以多孔凝膠為固定相,利用分子體積差異實現分離。大分子無法進入凝膠孔道,直接流出色譜柱;小分子則因擴散進入孔內而滯留更久。該技術特別適用于去除復雜基質中的大分子雜質(如蛋白質、油脂等),提升目標物檢測精度。

  儀器組成:包括溶劑貯存器、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器及數據系統。其中,檢測器分為濃度型(如紫外檢測器)和分子量型(如光散射檢測器)。

  二、流動相的準備與優化

  純度要求:需選用色譜純及以上***別的溶劑(如四氫呋喃、環己烷-乙酸乙酯混合液),避免雜質干擾分離效果。腐蝕性溶劑(如鹵代烴)需謹慎使用,防止損壞不銹鋼管路。

  過濾脫氣:流動相應通過0.45μm濾膜過濾,并超聲脫氣,以防止氣泡堵塞管路或影響基線穩定性。

  配制比例:嚴格遵循色譜柱標簽標注的溶劑比例,錯誤配比可能導致柱效下降甚至填料變形。例如,聚苯乙烯凝膠柱常用四氫呋喃作為流動相。

  三、樣品處理的關鍵步驟

  溶解與過濾:樣品應盡量用流動相溶解,減少溶劑極性差異對分離的影響。進樣前需經0.45μm濾膜過濾,防止顆粒物污染色譜柱。對于高粘度樣品,可適當稀釋以避免超載。

  除塵要求:在激光光散射實驗中,需對樣品進行嚴格除塵處理。配置測試樣品的溶劑應進行精餾,并經過0.2μm超濾膜過濾后方可使用。配好的溶液也要用0.2μm的超濾膜過濾。

  四、系統操作規范

  開機與平衡:依次開啟儀器電源,待檢測器自檢完成后啟動工作站軟件。新柱或長期未用的柱子需用流動相沖洗30分鐘以上以平衡柱效。若出現壓力異常升高,應立即停機檢查管路是否堵塞。

  方法設置:根據目標物分子量范圍選擇合適校正曲線范圍,確保樣品處于線性響應區間。編輯批表時需核對流速(通常5mL/min)、進樣體積等參數。

  洗脫收集:按預設程序自動收集目標組分,注意避開雜質峰。對于復雜基質(如動植物提取物),可采用分段收集策略提高純度。


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