***、聚合色譜柱再生的核心原則與前期準備

再生處理的核心是在不破壞聚合填料結構（如避免交聯鍵斷裂、孔徑變形）的前提下，通過選擇合適的溶劑體系洗脫污染物，同時保護柱床完整性。開展再生前需完成三項關鍵準備工作：***是明確污染類型，結合樣品基質推測污染物性質，例如生物樣品常含蛋白質類污染物，環境樣品可能殘留強極性有機物；二是收集色譜柱基礎信息，查閱說明書確認填料材質（如聚苯乙烯-二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸酯等）、耐溶劑范圍及耐受壓力（通常聚合柱耐受壓力低于硅膠柱，***般不超過20MPa）；三是進行柱性能基線測試，通過測定標準樣品（如苯系物混合標樣）的理論塔板數、分離度及對稱因子，建立再生前后的性能對比基準。

二、基于污染類型的針對性再生方法

聚合色譜柱的污染可分為可逆吸附污染與不可逆沉積污染，需根據污染物與填料的相互作用機制選擇洗脫策略，常用再生方法包括梯度洗脫法、特異性溶劑洗脫法及復合再生法。

（***）常規可逆吸附污染的梯度洗脫再生

對于樣品中弱至中等保留強度的污染物（如多數小分子有機物、部分極性雜質），可采用梯度洗脫方式逐步增強溶劑洗脫強度，實現污染物脫附。該方法適用于日常輕度污染的常規維護，具體操作步驟如下：***先用初始流動相（如甲醇-水體系）以0.5mL/min的低流速沖洗色譜柱10個柱體積（CV），去除柱內殘留樣品；隨后按比例梯度提升強洗脫溶劑比例，例如從甲醇-水（50:50，v/v）逐步過渡至純甲醇（***），保持流速0.8mL/min沖洗15-20CV；若使用反相色譜模式且污染物含極性成分，可進***步用甲醇-乙腈（50:50，v/v）沖洗10CV，增強對非極性污染物的洗脫效果；***后用初始流動相平衡10-15CV，直至基線穩定。該方法對聚合填料損傷小，再生后柱效恢復率通常可達85%以上。

（二）強保留有機物污染的特異性溶劑再生

當樣品中含多環芳烴、長鏈脂肪酸等強保留有機物時，常規梯度洗脫難以去除，需采用特異性溶劑體系破壞污染物與填料間的疏水相互作用。對于聚苯乙烯-二乙烯基苯（PS-DVB）類聚合柱，推薦采用“甲醇-四氫呋喃-甲醇”三步洗脫法：先用純甲醇沖洗10CV去除表面殘留，再以四氫呋喃（THF）為強洗脫劑，以0.3mL/min低速沖洗20-30CV，利用THF的強溶解能力剝離疏水吸附的污染物；由于THF對聚合填料有輕微溶脹作用，需隨后用純甲醇反向沖洗15CV，逐步收縮填料孔徑并洗脫殘留THF；***后用初始流動相平衡。若污染物為強極性物質（如氨基化合物），可在洗脫體系中加入0.1%（TFA），通過調節pH值減弱極性相互作用，但需注意TFA濃度不宜超過0.5%，且再生后需用含0.05%氨水的甲醇溶液中和沖洗5CV，避免酸性殘留腐蝕柱床。

（三）生物大分子污染的酶解-溶劑復合再生

生物樣品（如血清、尿液、植物提取液）分析后，蛋白質、核酸、多糖等生物大分子易通過疏水作用或氫鍵牢固吸附于聚合填料表面，甚至形成凝膠狀沉積堵塞孔徑，單純溶劑洗脫效果有限。此時需采用“酶解預處理+溶劑洗脫”的復合再生策略：***先配制含蛋白酶（如胰蛋白酶，濃度0.1mg/mL）的緩沖溶液（pH7.0磷酸鹽緩沖液），以0.2mL/min流速沖洗色譜柱30CV，在37℃恒溫條件下靜置2小時，使酶充分降解蛋白質類污染物；隨后用5%甲醇水溶液沖洗10CV去除殘留酶液，再按“水-甲醇-乙腈-甲醇”的順序梯度洗脫，每個溶劑階段沖洗15CV，流速控制在0.5mL/min；***后用含0.01%疊氮鈉的甲醇溶液沖洗5CV（抑制微生物滋生），并以純甲醇封存。該方法對生物污染柱的再生，可使理論塔板數恢復至新柱的80%以上。

（四）鹽類與顆粒物污染的沖洗再生

當流動相含緩沖鹽（如磷酸鹽、乙酸銨）或樣品含懸浮顆粒物時，易在柱入口形成鹽析結晶或顆粒物沉積，導致柱壓異常升高。此類污染的再生重點是“低強度溶解+物理沖洗”：***先將色譜柱反向連接（避免污染物推向柱床深處），用超純水以0.3mL/min低速沖洗20CV，溶解鹽類結晶；若柱壓仍偏高，可改用5%甲醇水溶液沖洗15CV，利用甲醇的弱洗脫能力輔助去除顆粒物；對于頑固顆粒物，可采用“水-甲醇-水”交替沖洗3個循環，通過溶劑粘度變化產生的剪切力剝離沉積物。需注意，沖洗過程中壓力不得超過色譜柱耐受壓力的80%，且再生后需正向連接，用初始流動相平衡至基線穩定。?

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